Multi-Locus Sequence typing of Treponema pallidum in male patients with genital ulcers in a public STD clinic in South Brazil: a new alelle and almost complete macrolide resistance

Resumo

Objetivo: Considerando a ausência de dados sobre a epidemiologia molecular do Treponema pallidum no Brasil, objetivamos a detecção e genotipagem de cepas de T. pallidum e resistência ao macrolídeo em úlceras genitais clinicamente sugestivas de sífilis.
Métodos: Foram convidados a participar homens maiores de 18 anos de uma clínica pública de IST. As amostras de exsudato foram coletadas com cotonete seco e imersas em solução de NaCl 0,9%. A detecção de T. pallidum foi feita por amplificação por PCR de 260 pb do gene tpp47 e o produto da PCR foi analisado por eletroforese em gel de agarose a 2% contendo brometo de etídio a 0,05%. As amostras de PCR positivas foram analisadas por MLST (sequenciamento dos loci cromossômicos TP0136, TP0548 e TP0705). As mutações A2058G e A2059G no gene 23S rRNA foram avaliadas por nested PCR. A análise do sequenciamento de DNA foi realizada utilizando o software Bioedit (Tom Hall, EUA). A genotipagem foi realizada na plataforma online PubMLST utilizando o esquema Grillová.
Resultados: Todos os sujeitos eram residentes de Porto Alegre e tinham idade entre 19 e 66 anos. Das 43 amostras, 32 foram positivas para PCR para T. pallidum. Trinta cepas estavam disponíveis para genotipagem e pertenciam ao Complexo Clonal SS14-like (73,3%) e ao Nichols-like (20%). Três perfis completos de MLST foram identificados (1.3.1, 9.7.3 e 28.7.3), e um novo alelo (x.x.11) no locus TP0705 foi identificado em uma amostra, a única amostra com sequenciamento de qualidade não possuía o 2058 mutação no gene 23S rRNA.
Conclusão: Nosso estudo identificou uma diversidade genética no DNA de T. pallidum usando MLST com variantes alélicas para TP0136, TP0548 e TP0705, incluindo um novo alelo, única amostra caracterizada como genotípica suscetível a macrolídeos. Todas as demais amostras (mais de 95%) apresentaram a mutação A2058G no gene 23S rRNA, que causa resistência aos macrolídeos. Introdução de técnicas moleculares, além de melhorar a compreensão local da estrutura populacional da sífilis e do T. pallidum e melhorar a qualidade da prevenção e atenção.