Multi-Locus Sequence typing of Treponema pallidum in male patients with genital ulcers in a public STD clinic in South Brazil: a new alelle and almost complete macrolide resistance

Resumen

Objetivo: Considerando la ausencia de datos sobre la epidemiología molecular de Treponema pallidum en Brasil, apuntamos a la detección y genotipado de cepas de T. pallidum y resistencia al macrólido en úlceras genitales clínicamente sugestivas de sífilis.
Métodos: Se invitó a participar a hombres mayores de 18 años de una clínica pública de ITS. Las muestras de exudado se recogieron con un hisopo de algodón seco y se sumergieron en una solución de NaCl al 0,9%. La detección de T. pallidum se realizó mediante amplificación por PCR de 260 pb del gen tpp47 y el producto de la PCR se analizó mediante electroforesis en gel de agarosa al 2% que contenía bromuro de etidio al 0,05%. Las muestras de PCR positivas se analizaron mediante MLST (secuenciación de los loci cromosómicos TP0136, TP0548 y TP0705). La mutación A2058G y A2059G en el gen 23S rRNA se evaluó mediante PCR anidada. El análisis de la secuenciación del ADN se realizó mediante el software Bioedit (Tom Hall, EE. UU.). El genotipado se realizó utilizando la plataforma en línea PubMLST utilizando el esquema Grillová.
Resultados: Todos los sujetos eran residentes de Porto Alegre y tenían entre 19 y 66 años. De las 43 muestras, 32 fueron positivas por PCR para T. pallidum. Treinta cepas estaban disponibles para el genotipado y pertenecían al Complejo Clonal SS14 (73,3%) y al Nichols (20%). Se identificaron tres perfiles MLST completos (1.3.1, 9.7.3 y 28.7.3) y se identificó un nuevo alelo (x.x.11) en el locus TP0705 en una muestra; la única muestra con secuenciación de calidad no tenía el 2058. Mutación en el gen 23S rRNA.
Conclusión: Nuestro estudio identificó una diversidad genética en el ADN de T. pallidum utilizando MLST con variantes alélicas para TP0136, TP0548 y TP0705, incluyendo un nuevo alelo, la única muestra caracterizada como genotípica susceptible a macrólidos. El resto de muestras (más del 95%) presentaron la mutación A2058G en el gen 23S rRNA, que provoca resistencia a los macrólidos. Introducción de técnicas moleculares, además de mejorar el conocimiento local de la estructura poblacional de sífilis y T. pallidum y mejorar la calidad de la prevención y atención.