CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE DOS TRÍMEROS DE LA PROTEÍNA DE LA DIVISIÓN CELULAR BACTERIANA (FtsZ) DE E. coli.

Resumen

La FtsZ es una proteína del divisoma bacteriano responsable de la formación del anillo Z en la citocinesis. La caracterización de los oligómeros de la proteína FtsZ de Escherichia coli (EcFtsZ) en su estado nativo es un desafío porque la proteína se encuentra como un multioligómero en equilibrio de autoasociación-disociación. Nosotros caracterizamos el estado trimérico de la EcFtsZ a través de técnicas de PAGE nativo, cromatografía de filtración en gel y gradiente de sacarosa combinada con entrecruzamiento químico. Los resultados por filtración indican que el trímero de EcFtsZ tiene una masa molecular de 131 kDa y un coeficiente de fricción por filtración (Rs/Rmin) igual a 1.9, mientras que el coeficiente de fricción por filtración teórico (fn/f1) calculado para un trímero lineal arrojó un valor igual a 1.8 que está muy cercano al valor experimental. Por otro lado, la EcFtsZ entrecruzada con formaldehído presentó una banda de 128 kDa reconocida por anticuerpos anti-FtsZ y un coeficiente de fricción por sedimentación (Smax/S20,w) igual a 1.9, mientras que el coeficiente de fricción por sedimentación teórico (Sn/S1) calculado para un trímero triangular resultó igual a valor experimental. Estos resultados sugieren que la EcFtsZ tiene dos estructuras homotriméricas (lineal y triangular). Finalmente, reportamos la agregación de la EcFtsZ a concentraciones micromolares de Capsaicina sin GTP y Mg2+.